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更新時(shí)間:2019-08-22 17:23:29
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貨號:WTA5153,產(chǎn)品名稱:小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒說明書,英文名稱:Mouse substance P receptor,SP-R ELISA Kit,品牌:進(jìn)口原裝/國產(chǎn)
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小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒說明書
,僅用于科研實(shí)驗(yàn),不可用于食品或者臨床,食用藥品等等
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ELISA
試劑盒的包被條件與封閉
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時(shí)間,包被液的
pH
等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定??贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用
pH9.6
的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用
pH7.2
的磷酸鹽緩沖液及
pH7~8
的
Tris-HCL
緩沖液作為稀釋液的。通常在
ELISA
板孔中加入包被液后,在
4-8
℃
冰箱中放置過夜,
37
℃
中保溫
2
小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的最適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為
100ng/ml-20ug/ml
。
封閉
(blocking)
是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程??乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在
ELISA
其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。最常用的封閉劑是
0.05%-0.5%
的牛血清白蛋白,也有用
10%
的小牛血清或
1%
明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其最da的特點(diǎn)是價(jià)廉,可以高濃度使用(
5%
)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,而且封閉后的載體不易長期保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。
封閉是否必要,取決于
ELISA
的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的
ELISA
固相均需封閉,封閉不當(dāng)反而會(huì)使陰性本底增高。一般說來,雙抗體夾心法,只要酶標(biāo)記物是高活性的,操作時(shí)洗滌徹底,不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí),因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面,業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中,封閉一般是不可少的(見
2.2.2
)。包被好的
ELISA
板干燥后放入密封袋或錫袋中,在低溫可保存數(shù)月。