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更新時(shí)間:2019-08-22 17:23:29
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貨號(hào):WTA6146,產(chǎn)品名稱:山羊腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒說明書,英文名稱:Goat Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit,品牌:進(jìn)口原裝/國產(chǎn)
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ELISA
試驗(yàn)
以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。在操作過程中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給實(shí)驗(yàn)師帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析
Elisa
試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法
1
選擇試劑
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡
30-60
分鐘。
2
加樣
可能原因:
1
)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2
)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長
(
特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)
)
;
3
)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法:
1
) 標(biāo)本為血清:
zui
好
將血液先自然存放
1-2
小時(shí)后,再用
3000rmp
離心
15
分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合
5-10
次,放置一段時(shí)間后,
3000rpm
離心
15
分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在
2-8
℃
冰箱中,若要貯存,則置于
-20
℃
的低溫冰箱內(nèi)。
2)
加樣后及時(shí)放入孵箱。
3)
加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4)
如果采用
AT
或其他全自動(dòng)加樣,
zui
好
選擇
FAME
或其他后處理儀器加酶試劑。
5)
標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3
孵育
可能原因:
1)
孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗徹底;
2)
孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。解決辦法:
1)
貼封片或加蓋;
2)
按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4
洗板
可能原因:
1)
采用手工洗板
,
孔與孔之間液體交叉。
2)
采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3)
反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1)
保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后
zui
好
在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2)
合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5
顯色
可能原因:
1)
顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2)
加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1)
顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的
TMB
顯色劑不用;
2)
加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A
、
B
液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6
終止
可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7
讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸
;
盡可能實(shí)現(xiàn)
ELISA
檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)
ELISA
標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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