貨號:WTA6267,產品名稱:兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒說明書,進口原裝試劑需要貨期,如需訂購,請咨詢或咨詢在線人員。上海蔚霆生物科技有限公司備有此中檢所標準品,中檢所對照品,sigma試劑,化學試劑,標準品,用于科研試驗研究,詳情請咨詢在線客服人員
更新時間:2019-08-22 17:23:29
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兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒說明書
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兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒說明書
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ELISA
實驗注意事項
1.
正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或
BSA
等封閉。
2.
在
ELISA
中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括
:
(1)
固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是
40
孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
(
2)
包被抗體
(
或抗原
)
的選擇:將抗體
(
或抗原
)
吸附在固相載體表面時,要求純度要好
,
吸附時一般要求
PH
在
9.0
~
9.6
之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響
,
一般多采用
4
℃
18
~
24
小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度
(0.1
、
1.0
和
10
μ
g
/
ml
等
)
進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的
OD
值。選擇
OD
值
zui大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為
1
~
10
μ
g
/
ml
。
(3)
酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接
ELISA
法進行初步效價的滴定
(
見酶標記抗體部份
)
。然后再固定其它條件或采取
“
方陣法
”
(
包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度
)
在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4)
酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體
(
如
OPD
等
)
有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如
TMB
和
ABTS
是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以
10-30
分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是
H2O2
在臨用前加入。